一文读懂：肿瘤诊断的金标准---病理诊断

​病理诊断是通过手术切除、内镜活检、细针穿刺等方式获取人体组织或细胞，借助显微镜等工具对样本进行一系列处理和观察，研究疾病病因、发病机制、形态结构、功能和代谢等方面的改变，揭示疾病的发生发展规律，从而阐明疾病本质的医学科学，是绝大部分疾病，尤其是肿瘤疾病的诊断“金标准”。

根据样本类型可分为组织学检查、细胞学检查两类。

二者取样方式并不相同，组织学样本一般通过开放手术、内镜检查或经皮穿刺活检获取，而细胞学样本一般通过体液、拉网、细针穿刺、脱落细胞等途径获取。

组织学检查和细胞学检查是病理诊断的两类基本方式，通常称为组织病理和细胞病理，主要进行的是形态学观察。

通过分别与免疫诊断、分子诊断相结合，病理诊断形成了另外两个重要分支：免疫病理和分子病理，将病理诊断从组织、细胞水平的形态学观察深入到蛋白与分子水平。

一、组织病理

组织学检查一般可分为石蜡切片和术中冰冻切片两种制片方式，二者应用场景不同，各有优劣。

• 石蜡切片应用最为广泛，但制片过程较为繁琐，耗时较长，一般需要3-5天才能出具结果，但清晰度较高，并且可以长期保存使用；

• 冰冻切片一般用于手术中快速诊断，通过低温将组织快速冷却硬化，仅需半小时左右即可 出具诊断结果，但制片质量不如石蜡切片，存在一定误诊率，对病理医师要求较高。

• TCT：利用将宫颈脱落细胞洗入细胞保存液瓶中，刮片毛刷在小瓶内搅拌，通过高精密度过滤膜过滤将标本中的杂质分离，取滤后的上皮细胞制成直径为20 mm薄层细胞于载玻片上，而后进行固定、染色、封片。

• LCT/LBP：采用两次离心及独立染色，在自动化、标准化等方面具有较大优势，可以实现对病理诊断质量的良好控制，目前已成为我国主流细胞学制片方式。除主要应用于宫颈细胞学检测以外，在痰、胸腹水、尿液、肺泡灌洗液等非妇科样本检测方面更具优势。

• 第一代定性PCR：通过琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行分析，分析仅停留在定性或半定量层面，且检测时间长、有交叉感染风险。

• 第二代qPCR（实时荧光定量PCR）：在PCR反应体系中加入可与DNA产物特异性结合的荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，通过标准曲线实现定量分析，数据采集可在PCR扩增过程中完成。

• 第三代dPCR（数字PCR）：基于芯片式液滴微流控技术，将一个样本分成几万到几百万份，分配到不同的反应单元，每个单元包含一个或多个拷贝的目标分子( DNA 模板) ，在每个反应单元中分别对目标分子进行 PCR 扩增，扩增结束后对各个反应单元的荧光信号进行统计学分析，可以对实现绝对定量检测。

• 检测灵敏度高，可检测肿瘤细胞中突变比例为1%甚至更 低的突变基因；
• 适用于片段化DNA，利于开展分子病理诊断（由于甲醛的固定处理，石蜡包埋标本组织的DNA 大部分片段化）；
• 结合qPCR实现闭管操作，可减少污染的可能性。