J Taibah Univ Med Sci：木薯叶提取物对牙周炎大鼠成纤维细胞和牙龈胶原密度的影响

牙周炎是一种常见的牙齿和口腔感染，其特征是慢性牙周组织炎症，包括牙龈炎症和牙槽骨丢失。根据基础卫生研究，牙周炎是印度尼西亚最普遍的口腔健康问题之一，发病率为74.1%。许多与牙周炎有关的物种，包括牙龈卟啉单胞菌、放线菌聚集菌和核梭杆菌，以及多微生物聚集体，能够侵入牙周组织，同时避开宿主的防御机制。牙周病可引起颌骨结构损伤和疼痛，引起破坏性活动。在更严重的情况下，持续增长的细菌感染甚至会导致死亡。

牙周炎主要是由牙龈假单胞菌引起的，这是一种在厌氧条件下繁殖的革兰氏阴性细菌，被认为是导致牙周病的炎症机制的主要原因。该细菌产生多种致牙周组织炎症的毒力因子，通过宿主受体，即宿主细胞表面的toll样受体2 (TLR-2)和TLR-4，触发先天免疫反应，使宿主细胞分泌肿瘤坏死因子α (TNF-a)、白细胞介素-1 (IL-1)、IL-6、IL-8.7e9，炎症可引起成纤维细胞数量减少和胶原破坏，导致附着丧失和牙周袋形成。

成纤维细胞在愈合过程的三个阶段都起着至关重要的作用。它们产生各种各样的调节分子，用来与参与愈合机制的其他细胞群体交流，协调整个修复过程。成纤维细胞和免疫细胞之间的相互作用揭示了伤口愈合早期阶段的特征。这表明成纤维细胞产生细胞外基质(ECM)的成分，并与内皮细胞和角质形成细胞相互作用。最后，通过分泌基质金属蛋白酶(MMPs)和其他基质成分，成纤维细胞有助于ECM的重塑。在增殖阶段，成纤维细胞的活性至关重要。在这个阶段，成纤维细胞在巨噬细胞和其他免疫细胞释放的生长因子的刺激下产生胶原(主要是III型)、蛋白聚糖、纤维连接蛋白、透明质酸和其他ECM分子。MMPs可以分解纤维蛋白凝块并促进细胞迁移，它也是由成纤维细胞产生的。支持角化细胞迁移的新的临时基质的凝固是重新上皮化所必需的。愈合过程是指成纤维细胞数量和胶原密度的增加。影响愈合过程的因素有伤口大小、位置、组织血管化和组织本身的功能作用。治疗牙周炎的首选药物之一是甲硝唑。甲硝唑能有效杀死牙龈卟啉卟啉菌，但可能引起副作用，包括恶心、口干、味觉受损、胃痉挛、神经毒性、头痛、共济失调(运动协调受损)、癫痫发作和脑病(脑部疾病)。因此，由于其副作用可以忽略不计，草药植物可能是牙周炎治疗的一种替代方法。

木薯叶(Manihot esculenta Crantz)是治疗牙周炎的潜在天然成分，它由皂苷、单宁、类黄酮和维生素c组成。它们具有抗菌和抗炎的特性。木薯叶提取物中的黄酮类化合物可以降低致病性，抑制核酸合成、胞质膜功能、能量代谢、附着和生物膜形成以及细胞膜上的孔蛋白。

因此，黄酮类化合物能够抑制牙龈假单胞菌的生长。木薯叶提取物通过抑制环氧化酶或脂氧化酶以及白细胞的积累，其抗炎特性可以降低牙周炎大鼠模型中TNF-a的表达。

另一项研究也表明，在大鼠体重为179.2 mg/ kg (BW)时，木薯叶具有有效的抗炎活性。由于木薯叶提取物在牙周炎愈合过程中具有促进牙周结构和功能恢复的新治疗潜力，因此探讨木薯叶提取物是否能增加牙龈假单胞菌诱导的牙周炎大鼠牙龈组织中成纤维细胞的数量和胶原蛋白的密度具有重要意义。

H&E染色大鼠牙龈组织学外观(1000 ?放大)。(A.1)颊龈(K);(A.2)舌龈(K);(B.1)颊龈(K?);(B.2)舌龈(K?);(C.1)颊龈(Kþ);(C.2)舌龈(Kþ);(D.1)颊龈(EC);(D.2)舌龈(EC)

黄色箭头表示成纤维细胞

小天狼星红染色大鼠牙龈的组织学外观(1000 ?放大)。(A.1)颊龈(K);(A.2)舌龈(K);(B.1)颊龈(K?);(B.2)舌龈(K?);(C.1)颊龈(Kþ);(C.2)舌龈(Kþ);(D.1)颊龈(EC);(D.2)舌龈(EC)。黄色箭头表示胶原纤维

用ImageJ软件分析各组胶原蛋白密度概况。(A.1)颊龈(K);(A.2)舌龈(K);(B.1)颊龈(K?);(B.2)舌龈(K?);(C.1)颊龈(Kþ);(C.2)舌龈(Kþ);(D.1)颊龈(EC);(D.2)舌龈(EC)。

黄色箭头表示胶原蛋白密度

柱状图为牙周炎模型大鼠牙龈胶原蛋白平均密度及LSD试验结果。资料:对照组(非牙龈假单胞菌诱导)。K ?1 .牙龈炎诱导大鼠组。

甲硝唑诱导大鼠组。牙龈炎诱导大鼠组+木薯叶提取物(*p < 0.05)

方法：采用单纯后测对照组。实验选用24只雄性Wistar大鼠，分为4组:对照组、牙龈假单胞菌诱导组并给予Aquadest、牙龈假单胞菌诱导组并给予甲硝唑、牙龈假单胞菌诱导组并给予木薯叶提取物。安乐死后取牙龈组织，进行组织学准备，观察成纤维细胞和胶原蛋白。

结果：单因素方差分析显示，各组间胶原密度、成纤维细胞数量差异有统计学意义(p < 0.05)，甲硝唑与木薯叶提取物在最不显著检验结果中差异无统计学意义(p > 0.05)。

结论：木薯叶提取物有增加牙周炎模型大鼠牙龈成纤维细胞数量和胶原密度的作用。

文献来源：

Shita ADP,  Dharmayanti AWS,  Meilawaty Z, Increasing fibroblasts and gingival collagen density in periodontitis rats by using cassava leaf extract.J Taibah Univ Med Sci 2023 Dec;18(6)